रक्त थेट पीसीआर किट

लक्ष्य जनुकाचे जलद प्रवर्धन थेट रक्ताचा वापर निष्कर्षाशिवाय टेम्पलेट म्हणून करणे.

मानवी जीनोममधील सिंगल-कॉपी जनुकांना कार्यक्षमतेने वाढवण्यासाठी हे किट अनुवांशिकदृष्ट्या इंजिनिअर केलेले अँटी-इनहिबिटर डीएनए पॉलिमरेझ स्वीकारते. या किटमधील चांगली ऑप्टिमायझ्ड बफर प्रणाली पॉलीमरेझला पीसीआर इनहिबिटरच्या निषेधाचा जोरदार प्रतिकार करण्यास मदत करते, त्यामुळे रक्त आणि सुसंस्कृत पेशी टेम्पलेट म्हणून वापरून थेट डीएनए वाढवू शकते. हे उत्पादन ऑपरेट करणे सोपे आहे आणि त्यासाठी डीएनए शुद्धीकरण किंवा नमुना प्रीट्रीटमेंटसारख्या क्लिष्ट पायऱ्यांची आवश्यकता नाही.
ही किट 2 × मास्टरमिक्स म्हणून प्रदान केली गेली आहे आणि प्रतिक्रिया फक्त रक्ताचा टेम्पलेट आणि संबंधित डिटेक्शन प्राइमर जोडून केली जाऊ शकते. हे सस्तन प्राण्यांच्या सुसंस्कृत पेशी जसे की मानव, उंदीर, डुकरे, गुरेढोरे आणि इतर प्रजातींवर तसेच ताजे किंवा 4 ℃ क्रायोप्रेस्ड संपूर्ण रक्त, अँटीकोआगुलंट (ईडीटीए, सायट्रेट, हेपरिन), द्रवरूप रक्ताच्या गुठळ्या आणि कोरड्या रक्ताच्या ठिपक्यांवर लागू केले जाऊ शकते. Whatman 903 आणि FTA Elute व्यावसायिक कार्डवर संग्रहित.

मांजर. नाही	पॅकिंग आकार
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

आम्हाला ईमेल पाठवा

उत्पादन तपशील

प्रायोगिक उदाहरण

वारंवार विचारले जाणारे प्रश्न

उत्पादन टॅग

वैशिष्ट्ये

■ सोपे आणि जलद: नमुना तयार करणे आणि डीएनए काढण्याच्या दमछाक न करता पीसीआर प्रवर्धन थेट रक्ताचा साचा म्हणून करता येते.
P उच्च शुद्धता: नमुना पूर्व-उपचार आणि डीएनए काढण्याच्या चरणांचे वगळणे नमुन्यांचे क्रॉस-दूषण टाळण्यास मदत करू शकते.
Through उच्च थ्रूपुट: मोठ्या प्रमाणावर नमुन्यांची पीसीआर ओळख 96/384-विहीर पीसीआर प्लेट्ससह किट एकत्र करून केली जाऊ शकते.
Univers मजबूत सार्वभौमिकता: ही किट उच्च जीसी तुकड्यांना किंवा जटिल दुय्यम संरचनेसह तुकड्यांना प्रभावीपणे वाढवू शकते आणि प्रवर्धन लांबी 5 केबी पर्यंत असू शकते.
Stress मजबूत ताण प्रतिकार: ही किट विविध प्रजाती आणि रक्ताच्या नमुन्यांसाठी वेगवेगळ्या प्रकारे संरक्षित केली जाऊ शकते.

अनुप्रयोग

या किटच्या पीसीआर उत्पादनांमध्ये 3′-एंडमध्ये "ए" असते, जे थेट टीए वेक्टर क्लोनिंगसाठी वापरले जाऊ शकते. या किटचा वापर जीनोमिक डीएनए तुकड्यांच्या प्रवर्धन, उच्च-थ्रूपुट अनुवांशिक विश्लेषण आणि जीनोटाइपिंग (जसे की जनुक शोध) विश्लेषणासाठी केला जाऊ शकतो.

सर्व उत्पादने ODM/OEM साठी सानुकूलित केली जाऊ शकतात. तपशीलांसाठी,कृपया सानुकूलित सेवा (ODM/OEM) वर क्लिक करा

मागील: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

पुढे: माउस टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर किट

	टेम्पलेट म्हणून मानवी ईडीटीए अँटीकोआग्युलेशनचा वापर करून, वेगवेगळ्या जीसी सामग्रीसह 4 जनुके ब्लड डायरेक्ट पीसीआर किटद्वारे वाढविली गेली. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली 20 μl होती आणि 1 μl रक्त टेम्पलेट म्हणून वापरले गेले. M: TIANGEN मार्कर II; 1: खंड आकार 1090 बीपी, जीसी सामग्री 68.1%; 2: खंड आकार 1915 बीपी, जीसी सामग्री 70.4%; 3: खंड आकार 448 बीपी, जीसी सामग्री 74.8%; 4: खंड आकार 1527 बीपी, जीसी सामग्री 61.5%. प्रायोगिक परिणाम: ब्लड डायरेक्ट पीसीआर किट जीसी सामग्रीसह 61.5%-74.8%च्या श्रेणीमध्ये डीएनए तुकड्यांना प्रभावीपणे वाढवू शकते, जे सूचित करते की ते उच्च-जीसी तुकड्यांना वाढविण्यास सक्षम आहे.
	ब्लड डायरेक्ट पीसीआर किटद्वारे मानवी EDTA अँटीकोआगुलेशनचा टेम्पलेट म्हणून वापर करून, वेगवेगळ्या लांबीचे 5 जनुके (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 आणि Hn4.0) वाढवण्यात आले. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली 20 μl होती आणि 1 μl रक्त टेम्पलेट म्हणून वापरले गेले. M: TIANGEN मार्कर II; 1-3: 3 वेगवेगळ्या रक्ताचे नमुने; NTC: प्राइमरशिवाय नियंत्रण. प्रायोगिक परिणाम: ब्लड डायरेक्ट पीसीआर किट 4 kb पर्यंत लांबीचे तुकडे वाढवू शकते, हे सुचवते की ते लांब तुकडे वाढवण्यास सक्षम आहे.
	टेम्पलेट म्हणून मानवी ईडीटीए अँटीकोआगुलेशनचा वापर करून, रक्ताचे डायरेक्ट पीसीआर किट वेगवेगळ्या रक्ताच्या नमुन्यांच्या पीसीआर तपासणीसाठी वापरले गेले. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली 20 μl होती आणि 1 μl रक्त टेम्पलेट म्हणून वापरले गेले. M: TIANGEN मार्कर II; 1-9: रक्ताची लोडिंग मात्रा अनुक्रमे 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl आणि 5 μl आहे; NTC: टेम्पलेट नसलेले नियंत्रण प्रायोगिक परिणाम: ब्लड डायरेक्ट पीसीआर किटमध्ये रक्ताला तीव्र प्रतिकार असतो आणि 0.1-5 μl च्या लोडिंग श्रेणीसह रक्ताचे नमुने वाढवू शकतो.
	मानव, उंदीर, कोंबडी आणि इतर प्रजातींच्या रक्ताचे नमुने वेगवेगळ्या उपचारांसह टेम्पलेट म्हणून वापरले गेले. ब्लड डायरेक्ट पीसीआर किटचा वापर पीआरएनपी (मानवी, 750 बीपी), अॅक्टिन (उंदीर, 200 बीपी) आणि β-Actक्टिन (चिकन, 1.0 केबी) वाढवण्यासाठी केला गेला. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली 20 μl होती आणि 1 μl रक्त टेम्पलेट म्हणून वापरले गेले. M: TIANGEN मार्कर II. प्रायोगिक परिणाम: रक्त डायरेक्ट पीसीआर किट विस्तृत नमुन्यांवर लागू केले जाऊ शकते, आणि थेट पीसीआर डिटेक्शन विविध प्रजातींमधील रक्ताच्या नमुन्यांवर वेगवेगळ्या उपचारांद्वारे केले जाऊ शकते.

प्रश्न: प्रवर्धन बँड नाहीत

A-1 साचा

Template टेम्पलेटमध्ये प्रथिनेची अशुद्धता किंवा टाक इनहिबिटर वगैरे असतात. DNA डीएनए टेम्पलेट शुद्ध करा, प्रोटीनची अशुद्धता काढून टाका किंवा शुध्दीकरण किटसह टेम्पलेट डीएनए काढा.

Template टेम्पलेटचे विकृतीकरण पूर्ण झाले नाही den योग्यरित्या विकृतीकरण तापमान वाढवा आणि विकृतीकरण वेळ वाढवा.

■ टेम्पलेट डिग्रेडेशन the टेम्पलेट पुन्हा तयार करा.

ए -2 प्राइमर

Pri प्राइमरची खराब गुणवत्ता-प्राइमर पुन्हा संश्लेषित करा.

■ प्राइमर डिग्रेडेशन —— उच्च एकाग्रतेच्या प्राइमर्सला संरक्षणासाठी लहान प्रमाणात विभाजित करा. एकाधिक गोठवणे आणि पिघलना किंवा दीर्घकालीन 4 ° C क्रायोप्रेस्ड टाळा.

Pri प्राइमर्सची अयोग्य रचना (उदा. प्राइमरची लांबी पुरेशी नाही, प्राइमरच्या दरम्यान डायमर तयार होतो इ.)

A-3 Mg²⁺एकाग्रता

■ एमजी²⁺ एकाग्रता खूप कमी आहे - Mg मध्ये योग्य वाढ करा²⁺एकाग्रता: एमजी ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

ए -4 एनीलिंग तापमान

An उच्च एनीलिंग तापमान प्राइमर आणि टेम्पलेटच्या बंधनावर परिणाम करते. Neनीलिंग तापमान कमी करा आणि 2 ° C च्या ग्रेडियंटसह स्थिती अनुकूल करा.

A-5 विस्तार वेळ

■ लहान विस्तार वेळ extension विस्तार वेळ वाढवा.

प्रश्न: खोटे सकारात्मक

घटना: samplesणात्मक नमुने देखील लक्ष्य अनुक्रम बँड दर्शवतात.

पीसीआरचे ए -1 संदूषण

Target लक्ष्य अनुक्रम किंवा प्रवर्धन उत्पादनांचे क्रॉस दूषण - sampleणात्मक नमुन्यात लक्ष्य अनुक्रम असलेले नमुना पाईपेट करू नये किंवा त्यांना सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमधून बाहेर टाकू नये. विद्यमान न्यूक्लिक acसिड नष्ट करण्यासाठी अभिकर्मक किंवा उपकरणे स्वयंचलित केली पाहिजेत आणि नकारात्मक नियंत्रणाच्या प्रयोगांद्वारे दूषित होण्याचे अस्तित्व निश्चित केले पाहिजे.

■ अभिकर्मक दूषित the अभिकर्मक आणि कमी तापमानावर साठवा.

ए -2 प्राइमr

■ एमजी²⁺ एकाग्रता खूप कमी आहे - Mg मध्ये योग्य वाढ करा²⁺ एकाग्रता: एमजी ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

■ अयोग्य प्राइमर डिझाइन, आणि लक्ष्य अनुक्रमामध्ये लक्ष्य नसलेल्या अनुक्रमासह एकरूपता आहे. -प्राइमर पुन्हा डिझाइन करा.

प्रश्न: विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन

घटना: पीसीआर प्रवर्धन बँड अपेक्षित आकाराशी विसंगत असतात, एकतर मोठे किंवा लहान, किंवा कधीकधी दोन्ही विशिष्ट प्रवर्धन बँड आणि विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन बँड होतात.

ए -1 प्राइमर

Pri खराब प्राइमर विशिष्टता

-प्राइमर पुन्हा डिझाइन करा.

■ प्राइमर एकाग्रता खूप जास्त आहे - योग्यरित्या विकृतीकरण तापमान वाढवा आणि विकृतीकरण वेळ वाढवा.

A-2 Mg²⁺ एकाग्रता

Mg एमजी²⁺ एकाग्रता खूप जास्त आहे - Mg2+ एकाग्रता योग्यरित्या कमी करा: Mg ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

ए -3 थर्मोस्टेबल पॉलिमरेज

En जास्त सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य प्रमाण en 0.5 U च्या अंतराने सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य प्रमाण योग्यरित्या कमी करा.

ए -4 एनीलिंग तापमान

Ne neनीलिंग तापमान खूप कमी आहे rop neनीलिंग तापमान योग्यरित्या वाढवा किंवा दोन-स्टेज अॅनीलिंग पद्धत स्वीकारा

A-5 PCR सायकल

PC खूप जास्त पीसीआर सायकल - पीसीआर सायकलची संख्या कमी करा.

प्रश्न: पॅची किंवा स्मीयर बँड

ए -1 प्राइमरOor खराब विशिष्टता-प्राइमरची पुन्हा रचना करा, प्राइमरची स्थिती आणि लांबी बदलून त्याची विशिष्टता वाढवा; किंवा नेस्टेड पीसीआर करा.

A-2 साचा DNA

- टेम्पलेट शुद्ध नाही - टेम्पलेट शुद्ध करा किंवा शुध्दीकरण किटसह डीएनए काढा.

A-3 Mg²⁺ एकाग्रता

—— एमजी²⁺ एकाग्रता खूप जास्त आहे - एमजी योग्यरित्या कमी करा²⁺ एकाग्रता: एमजी ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

A-4 dNTP

- डीएनटीपीची एकाग्रता खूप जास्त आहे - डीएनटीपीची एकाग्रता योग्यरित्या कमी करा

ए -5 एनीलिंग तापमान

Low खूप कमी neनीलिंग तापमान - neनीलिंग तापमान योग्यरित्या वाढवा

A-6 सायकल

- बरीच सायकल - सायकल संख्या ऑप्टिमाइझ करा

प्रश्न: 50 μl पीसीआर रि systemक्शन सिस्टीममध्ये किती साचा डीएनए जोडला जावा?

प्रश्न: लांब तुकडे कसे वाढवायचे?

पहिली पायरी म्हणजे योग्य पॉलिमरेज निवडणे. 3'-5 'एक्झोन्यूक्लीझ अॅक्टिव्हिटीच्या अभावामुळे नियमित टाक पॉलिमरेझ प्रूफरीड करू शकत नाही आणि न जुळल्याने तुकड्यांची विस्तार कार्यक्षमता मोठ्या प्रमाणात कमी होईल. म्हणून, नियमित ताक पॉलिमरेझ 5 केबी पेक्षा मोठ्या लक्ष्यित तुकड्यांना प्रभावीपणे वाढवू शकत नाही. विस्तार कार्यक्षमता सुधारण्यासाठी आणि दीर्घ खंड प्रवर्धनाच्या गरजा पूर्ण करण्यासाठी विशेष सुधारणा किंवा इतर उच्च निष्ठा असलेल्या पॉलिमरेझसह ताक पॉलिमरेज निवडले पाहिजे. याव्यतिरिक्त, लांब तुकड्यांच्या प्रवर्धनासाठी देखील प्राइमर डिझाइन, डिनाटुरेशन वेळ, विस्तार वेळ, बफर पीएच इत्यादींचे समायोजन आवश्यक आहे, सहसा, 18-24 बीपी सह प्राइमर चांगले उत्पादन देऊ शकतात. टेम्पलेटचे नुकसान टाळण्यासाठी, 94 ° C वर विकृतीकरण वेळ प्रति सेकंद 30 सेकंद किंवा त्यापेक्षा कमी असावा आणि प्रवर्धन करण्यापूर्वी तापमान 94 ° C पर्यंत वाढवण्याची वेळ 1 मिनिटापेक्षा कमी असावी. शिवाय, विस्तार तपमान सुमारे 68 ° C वर सेट करणे आणि 1 kb/min च्या दरानुसार विस्तार वेळेची रचना करणे लांब तुकड्यांचे प्रभावी प्रवर्धन सुनिश्चित करू शकते.

प्रश्न: पीसीआरची प्रवर्धन निष्ठा कशी सुधारता येईल?

उच्च निष्ठा असलेल्या विविध डीएनए पॉलिमेरेसचा वापर करून पीसीआर प्रवर्धनाचा त्रुटी दर कमी केला जाऊ शकतो. आतापर्यंत सापडलेल्या सर्व ताक डीएनए पॉलिमेरेसमध्ये, पीएफयू एंजाइममध्ये सर्वात कमी त्रुटी दर आणि सर्वोच्च निष्ठा आहे (संलग्न तक्ता पहा). सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य निवड व्यतिरिक्त, संशोधक प्रतिक्रिया परिस्थिती अनुकूल करून पीसीआर उत्परिवर्तन दर कमी करू शकतात, ज्यात बफर रचना, थर्मोस्टेबल पॉलिमरेझची एकाग्रता आणि पीसीआर सायकल क्रमांक ऑप्टिमाइझ करणे समाविष्ट आहे.

तुमचा संदेश इथे लिहा आणि आम्हाला पाठवा

उत्पादनांच्या श्रेणी

आम्हाला का निवडावे

स्थापनेपासून, आमचा कारखाना तत्त्वाचे पालन करून प्रथम जागतिक दर्जाची उत्पादने विकसित करीत आहे
प्रथम गुणवत्तेचे. आमच्या उत्पादनांनी उद्योगात उत्कृष्ट प्रतिष्ठा मिळवली आहे आणि नवीन आणि जुन्या ग्राहकांमध्ये मूल्यवान विश्वास आहे.

चौकशी