2 × ताक प्लॅटिनम पीसीआर मिक्स

अल्ट्रा-शुद्ध हॉटस्टार्ट उच्च-निष्ठा थर्मोस्टेबल डीएनए पॉलिमरेझ.

ताक प्लॅटिनम डीएनए पॉलिमरेझ एक रासायनिक-सुधारित हॉटस्टार्ट ताक पॉलिमरेज आहे ज्यामध्ये 3′-5 ′ एक्सोन्यूक्लीझ अॅक्टिव्हिटी आणि 5′-3 ′ एक्सोन्यूक्लीझ अॅक्टिव्हिटी आहे. ताक प्लॅटिनम डीएनए पॉलिमरेझची एंजाइम क्रियाकलाप खोलीच्या तपमानावर अवरोधित केली जाते. त्याची क्रिया 5-10 मिनिटांसाठी 94 डिग्री सेल्सियसवर गरम झाल्यानंतरच सक्रिय केली जाऊ शकते, अशा प्रकारे पीसीआर प्रतिक्रियाच्या प्रारंभिक चक्राच्या आधी कमी तापमानात प्राइमर नॉन-स्पेसिफिक एनीलिंग किंवा प्राइमर डिमरमुळे होणारे गैर-विशिष्ट प्रवर्धन टाळता येते आणि संवेदनशीलता मोठ्या प्रमाणात सुधारते. आणि पीसीआर प्रतिक्रियेची विशिष्टता. याव्यतिरिक्त, ताक प्लॅटिनम डीएनए पॉलिमरेझमध्ये खूप उच्च निष्ठा आहे, जे पीएफयू पॉलिमरेझच्या नंतर दुसरे सर्वोत्तम आहे. डीएनए पॉलिमरायझेशनचा विस्तार गती पीएफयू पॉलिमरेझपेक्षा वेगवान आहे आणि प्रवर्धन कार्यक्षमता जास्त आहे.

मांजर. नाही	पॅकिंग आकार
4992789	5x1 मिली
4992790	5 × 1 मिली

आम्हाला ईमेल पाठवा

उत्पादन तपशील

प्रायोगिक उदाहरण

वारंवार विचारले जाणारे प्रश्न

उत्पादन टॅग

क्रियाकलाप व्याख्या

1 युनिट (यू) ताक प्लॅटिनम डीएनए पॉलिमरेझ क्रियाकलाप 10 एनएमओएल डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड्सला acidसिड-अघुलनशील पदार्थांमध्ये 74 डिग्री सेल्सिअसमध्ये एक्टिवेटेड सॅल्मन स्पर्म डीएनए टेम्पलेट/प्राइमर म्हणून वापरण्यासाठी आवश्यक असलेल्या एंजाइमच्या प्रमाणात परिभाषित केले जाते.

गुणवत्ता नियंत्रण

SDS-PAGE तपासणीद्वारे शुद्धता 99%पेक्षा जास्त आहे; एक्सोजेनस न्यूक्लीजची कोणतीही क्रियाकलाप आढळली नाही; मानवी जीनोममधील सिंगल-कॉपी जनुक प्रभावीपणे वाढवले जाऊ शकते; खोलीच्या तपमानावर एका आठवड्यासाठी साठवल्यास कोणतीही महत्त्वपूर्ण क्रियाकलाप बदलत नाही.

मुख्य तांत्रिक मापदंड

यात 5′-3 ′ exonuclease क्रियाकलाप आणि 3′-5 ′ exonuclease क्रियाकलाप आहे आणि त्याची निष्ठा Pfu polymerase च्या पुढे आहे. ताक प्लॅटिनम पॉलिमरेझचा विस्तार गती पीएफयू पॉलिमरेझपेक्षा वेगवान आहे आणि प्रवर्धन कार्यक्षमता जास्त आहे. पीसीआर उत्पादने थेट बोथट टोकाशी जोडली जाऊ शकतात किंवा टीए वेक्टरसह क्लोन केली जाऊ शकतात. क्लोनिंगची कार्यक्षमता सुधारण्याची आवश्यकता असल्यास, टीए वेक्टरमध्ये क्लोनिंग करण्यापूर्वी प्रथम शुद्ध करण्याची आणि 3'-डीए ओव्हरहॅंग जोडण्याची शिफारस केली जाते.

वन-ट्यूब ताक प्लॅटिनम मास्टरमिक्स (राष्ट्रीय उच्च-तंत्र उत्पादन प्रमाणन)

Q ताक प्लॅटिनम मास्टरमिक्सने पीसीआर प्रतिक्रियाची विशिष्टता आणि संवेदनशीलता सुधारली आहे आणि उच्च जीसी सामग्री, दुय्यम संरचना आणि यासारख्या जटिल टेम्पलेट्स वाढवू शकते. अधिक अचूक प्रायोगिक परिणामांची खात्री करून, लक्ष्य साच्याच्या 2 प्रती कमी केल्या जाऊ शकतात.

Ta अद्वितीय Taq प्लॅटिनम MasterMix सूत्र संपूर्ण प्रतिक्रिया प्रणाली अतिशय स्थिर करते, आणि क्रियाकलाप 4 repeated C वर वारंवार फ्रीज-थॉ किंवा दीर्घकालीन स्टोरेजमुळे प्रभावित होणार नाही.

And स्थिर आणि कार्यक्षम पूर्व-तयार पीसीआर मिश्रित समाधान ऑपरेशन जलद आणि सोपे करू शकते, श्रम तीव्रता आणि नमुना त्रुटी मोठ्या प्रमाणात कमी करते. उच्च कार्यक्षमता पीसीआर वर्धक आणि ऑप्टिमायझर देखील मिक्समध्ये समाविष्ट केले गेले आहे, जे पीसीआर अटींवर आवश्यकता कमी करते.

Product या उत्पादनामध्ये डाई-युक्त आणि डाई-फ्री दोन्ही प्रणाली आहेत. डाई-युक्त मास्टरमिक्स उत्पादने पीसीआर नंतर थेट इलेक्ट्रोफोरेस्ड केली जाऊ शकतात, लोडिंग बफर न जोडता.

अनुप्रयोग

जीनोमसारख्या जटिल टेम्पलेटमधून उच्च निष्ठा उत्पादने वाढवण्यासाठी हे पीएफयू पॉलिमरेज बदलू शकते आणि ते अभिव्यक्ती जीन्सचे क्लोनिंग, साइट-विशिष्ट उत्परिवर्तन आणि सिंगल न्यूक्लियोटाइड पॉलिमॉर्फिझम (एसएनपी) इत्यादी अनुप्रयोगांसाठी उपयुक्त आहे.

पीसीआर प्राइमर डिझाइन करताना खबरदारी:

प्राइमरची लांबी सहसा 20-25 मेर असते. तथापि, लांब तुकडा पीसीआर करताना, प्राइमरची लांबी 30-35 मेर पर्यंत वाढवली पाहिजे.

Pri दोन प्राइमरमध्ये पूरक जोडणी नाही, विशेषत: 3 ′ टोकावरील शेवटच्या 3 बेससाठी.

C GC सामग्री 50-60%असावी आणि स्थानिक श्रीमंत GC किंवा AT टाळा. प्राइमर आणि टेम्प्लेटला स्थिरपणे बांधण्यासाठी, 3 ′ शेवटी समृद्ध रचना टाळा.

Secondary दुय्यम रचना तयार करण्यासाठी प्राइमर टाळा.

M Tm तापमान एकमेकांजवळ असलेल्या दोन प्राइमर निवडा.

पीसीआरसाठी प्राइमर्सच्या टीएम मूल्याची गणना:

■ जेव्हा प्राइमर 20 मेर पेक्षा कमी असेल: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).

■ जेव्हा प्राइमर 20 मेर पेक्षा जास्त असेल: Tm = 81.5+0.41 G (GC%)-600/L, जिथे L प्राइमरची लांबी असते.

T एनीलिंग तापमान (Tm-5) ■ C वर सेट करा.

पीसीआर प्राइमर इनपुट

प्राइमरची योग्य अंतिम एकाग्रता 0.1 μM आणि 1.0 μM दरम्यान निवडली जाऊ शकते. खूप कमी प्राइमर एकाग्रतेमुळे प्रवर्धन उत्पादनांचे उत्पादन कमी होते, तर प्राइमरची उच्च एकाग्रता विशिष्ट नसलेल्या प्रवर्धनासाठी अधिक प्रवण असते. सहसा, जेव्हा टेम्पलेट डीएनएचे प्रमाण मोठे किंवा जटिल टेम्पलेट डीएनए (जसे की मानवी जीनोम डीएनए) टेम्पलेट म्हणून वापरले जाते, तेव्हा प्राइमर एकाग्रता कमी असावी. जेव्हा टेम्पलेट डीएनएचे प्रमाण लहान किंवा साधे टेम्पलेट डीएनए (उदा., प्लास्मिड डीएनए इ.) टेम्पलेट म्हणून वापरले जाते, तेव्हा प्राइमर एकाग्रता जास्त असावी.

सर्व उत्पादने ODM/OEM साठी सानुकूलित केली जाऊ शकतात. तपशीलांसाठी,कृपया सानुकूलित सेवा (ODM/OEM) वर क्लिक करा

मागील: 2, हॉटस्टार्ट टॅक पीसीआर मिक्स

पुढे: 2 × Taq Plus PCR मिक्स

1 केबीचा तुकडा वाढवण्यासाठी टेम्पलेट म्हणून जीनोमिक डीएनए वापरा पीसीआर प्रतिक्रिया नंतर, इलेक्ट्रोफोरेसीस डिटेक्शनसाठी 5 μl घ्या.

प्रश्न: प्रवर्धन बँड नाहीत

A-1 साचा

Template टेम्पलेटमध्ये प्रथिनेची अशुद्धता किंवा टाक इनहिबिटर वगैरे असतात. DNA डीएनए टेम्पलेट शुद्ध करा, प्रोटीनची अशुद्धता काढून टाका किंवा शुध्दीकरण किटसह टेम्पलेट डीएनए काढा.

Template टेम्पलेटचे विकृतीकरण पूर्ण झाले नाही den योग्यरित्या विकृतीकरण तापमान वाढवा आणि विकृतीकरण वेळ वाढवा.

■ टेम्पलेट डिग्रेडेशन the टेम्पलेट पुन्हा तयार करा.

ए -2 प्राइमर

Pri प्राइमरची खराब गुणवत्ता-प्राइमर पुन्हा संश्लेषित करा.

■ प्राइमर डिग्रेडेशन —— उच्च एकाग्रतेच्या प्राइमर्सला संरक्षणासाठी लहान प्रमाणात विभाजित करा. एकाधिक गोठवणे आणि पिघलना किंवा दीर्घकालीन 4 ° C क्रायोप्रेस्ड टाळा.

Pri प्राइमर्सची अयोग्य रचना (उदा. प्राइमरची लांबी पुरेशी नाही, प्राइमरच्या दरम्यान डायमर तयार होतो इ.)

A-3 Mg²⁺एकाग्रता

■ एमजी²⁺ एकाग्रता खूप कमी आहे - Mg मध्ये योग्य वाढ करा²⁺एकाग्रता: एमजी ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

ए -4 एनीलिंग तापमान

An उच्च एनीलिंग तापमान प्राइमर आणि टेम्पलेटच्या बंधनावर परिणाम करते. Neनीलिंग तापमान कमी करा आणि 2 ° C च्या ग्रेडियंटसह स्थिती अनुकूल करा.

A-5 विस्तार वेळ

■ लहान विस्तार वेळ extension विस्तार वेळ वाढवा.

प्रश्न: खोटे सकारात्मक

घटना: samplesणात्मक नमुने देखील लक्ष्य अनुक्रम बँड दर्शवतात.

पीसीआरचे ए -1 संदूषण

Target लक्ष्य अनुक्रम किंवा प्रवर्धन उत्पादनांचे क्रॉस दूषण - sampleणात्मक नमुन्यात लक्ष्य अनुक्रम असलेले नमुना पाईपेट करू नये किंवा त्यांना सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमधून बाहेर टाकू नये. विद्यमान न्यूक्लिक acसिड नष्ट करण्यासाठी अभिकर्मक किंवा उपकरणे स्वयंचलित केली पाहिजेत आणि नकारात्मक नियंत्रणाच्या प्रयोगांद्वारे दूषित होण्याचे अस्तित्व निश्चित केले पाहिजे.

■ अभिकर्मक दूषित the अभिकर्मक आणि कमी तापमानावर साठवा.

ए -2 प्राइमr

■ एमजी²⁺ एकाग्रता खूप कमी आहे - Mg मध्ये योग्य वाढ करा²⁺ एकाग्रता: एमजी ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

■ अयोग्य प्राइमर डिझाइन, आणि लक्ष्य अनुक्रमामध्ये लक्ष्य नसलेल्या अनुक्रमासह एकरूपता आहे. -प्राइमर पुन्हा डिझाइन करा.

प्रश्न: विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन

घटना: पीसीआर प्रवर्धन बँड अपेक्षित आकाराशी विसंगत असतात, एकतर मोठे किंवा लहान, किंवा कधीकधी दोन्ही विशिष्ट प्रवर्धन बँड आणि विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन बँड होतात.

ए -1 प्राइमर

Pri खराब प्राइमर विशिष्टता

-प्राइमर पुन्हा डिझाइन करा.

■ प्राइमर एकाग्रता खूप जास्त आहे - योग्यरित्या विकृतीकरण तापमान वाढवा आणि विकृतीकरण वेळ वाढवा.

A-2 Mg²⁺ एकाग्रता

Mg एमजी²⁺ एकाग्रता खूप जास्त आहे - Mg2+ एकाग्रता योग्यरित्या कमी करा: Mg ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

ए -3 थर्मोस्टेबल पॉलिमरेज

En जास्त सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य प्रमाण en 0.5 U च्या अंतराने सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य प्रमाण योग्यरित्या कमी करा.

ए -4 एनीलिंग तापमान

Ne neनीलिंग तापमान खूप कमी आहे rop neनीलिंग तापमान योग्यरित्या वाढवा किंवा दोन-स्टेज अॅनीलिंग पद्धत स्वीकारा

A-5 PCR सायकल

PC खूप जास्त पीसीआर सायकल - पीसीआर सायकलची संख्या कमी करा.

प्रश्न: पॅची किंवा स्मीयर बँड

ए -1 प्राइमरOor खराब विशिष्टता-प्राइमरची पुन्हा रचना करा, प्राइमरची स्थिती आणि लांबी बदलून त्याची विशिष्टता वाढवा; किंवा नेस्टेड पीसीआर करा.

A-2 साचा DNA

- टेम्पलेट शुद्ध नाही - टेम्पलेट शुद्ध करा किंवा शुध्दीकरण किटसह डीएनए काढा.

A-3 Mg²⁺ एकाग्रता

—— एमजी²⁺ एकाग्रता खूप जास्त आहे - एमजी योग्यरित्या कमी करा²⁺ एकाग्रता: एमजी ऑप्टिमाइझ करा²⁺ इष्टतम एमजी निर्धारित करण्यासाठी 0.5 मिमीच्या अंतराने 1 एमएम ते 3 एमएम पर्यंत प्रतिक्रियांच्या मालिकेद्वारे एकाग्रता²⁺ प्रत्येक टेम्पलेट आणि प्राइमरसाठी एकाग्रता.

A-4 dNTP

- डीएनटीपीची एकाग्रता खूप जास्त आहे - डीएनटीपीची एकाग्रता योग्यरित्या कमी करा

ए -5 एनीलिंग तापमान

Low खूप कमी neनीलिंग तापमान - neनीलिंग तापमान योग्यरित्या वाढवा

A-6 सायकल

- बरीच सायकल - सायकल संख्या ऑप्टिमाइझ करा

प्रश्न: 50 μl पीसीआर रि systemक्शन सिस्टीममध्ये किती साचा डीएनए जोडला जावा?

प्रश्न: लांब तुकडे कसे वाढवायचे?

पहिली पायरी म्हणजे योग्य पॉलिमरेज निवडणे. 3'-5 'एक्झोन्यूक्लीझ अॅक्टिव्हिटीच्या अभावामुळे नियमित टाक पॉलिमरेझ प्रूफरीड करू शकत नाही आणि न जुळल्याने तुकड्यांची विस्तार कार्यक्षमता मोठ्या प्रमाणात कमी होईल. म्हणून, नियमित ताक पॉलिमरेझ 5 केबी पेक्षा मोठ्या लक्ष्यित तुकड्यांना प्रभावीपणे वाढवू शकत नाही. विस्तार कार्यक्षमता सुधारण्यासाठी आणि दीर्घ खंड प्रवर्धनाच्या गरजा पूर्ण करण्यासाठी विशेष सुधारणा किंवा इतर उच्च निष्ठा असलेल्या पॉलिमरेझसह ताक पॉलिमरेज निवडले पाहिजे. याव्यतिरिक्त, लांब तुकड्यांच्या प्रवर्धनासाठी देखील प्राइमर डिझाइन, डिनाटुरेशन वेळ, विस्तार वेळ, बफर पीएच इत्यादींचे समायोजन आवश्यक आहे, सहसा, 18-24 बीपी सह प्राइमर चांगले उत्पादन देऊ शकतात. टेम्पलेटचे नुकसान टाळण्यासाठी, 94 ° C वर विकृतीकरण वेळ प्रति सेकंद 30 सेकंद किंवा त्यापेक्षा कमी असावा आणि प्रवर्धन करण्यापूर्वी तापमान 94 ° C पर्यंत वाढवण्याची वेळ 1 मिनिटापेक्षा कमी असावी. शिवाय, विस्तार तपमान सुमारे 68 ° C वर सेट करणे आणि 1 kb/min च्या दरानुसार विस्तार वेळेची रचना करणे लांब तुकड्यांचे प्रभावी प्रवर्धन सुनिश्चित करू शकते.

प्रश्न: पीसीआरची प्रवर्धन निष्ठा कशी सुधारता येईल?

उच्च निष्ठा असलेल्या विविध डीएनए पॉलिमेरेसचा वापर करून पीसीआर प्रवर्धनाचा त्रुटी दर कमी केला जाऊ शकतो. आतापर्यंत सापडलेल्या सर्व ताक डीएनए पॉलिमेरेसमध्ये, पीएफयू एंजाइममध्ये सर्वात कमी त्रुटी दर आणि सर्वोच्च निष्ठा आहे (संलग्न तक्ता पहा). सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य निवड व्यतिरिक्त, संशोधक प्रतिक्रिया परिस्थिती अनुकूल करून पीसीआर उत्परिवर्तन दर कमी करू शकतात, ज्यात बफर रचना, थर्मोस्टेबल पॉलिमरेझची एकाग्रता आणि पीसीआर सायकल क्रमांक ऑप्टिमाइझ करणे समाविष्ट आहे.

तुमचा संदेश इथे लिहा आणि आम्हाला पाठवा

उत्पादनांच्या श्रेणी

आम्हाला का निवडावे

स्थापनेपासून, आमचा कारखाना तत्त्वाचे पालन करून प्रथम जागतिक दर्जाची उत्पादने विकसित करीत आहे
प्रथम गुणवत्तेचे. आमच्या उत्पादनांनी उद्योगात उत्कृष्ट प्रतिष्ठा मिळवली आहे आणि नवीन आणि जुन्या ग्राहकांमध्ये मूल्यवान विश्वास आहे.

चौकशी